[PORTADA]


TRANSFERENCIA (BLOTTING)

 
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la autorradiografía, y permite identificar la presencia de una banda concreta en un gel de electroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
  • Si se trata de proteínas, la técnica se llama Western blot. Se utilizan anticuerpos marcados con radioactividad para identificar cuál es la banda que presenta la proteína que me interesa localizar
  • Si se trata de DNA, la técnica se llama Southern blot. Se utilizan sondas de DNA (moléculas de DNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda
  • Si se trata de RNA, la técnica se llama Northern blot. Se utilizan sondas de RNA (moléculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda

ELECTROFORESIS

Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis

  • Con proteínas se utiliza un gel de poliacrilamida
  • Con ácidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa

TRANSFERENCIA (BLOTTING)

Se transfieren las bandas de proteínas o de ácidos nucleicos desde el gel hacia una membrana de nitrocelulosa (flechas azules) para que puedan reaccionar con la sonda radioactiva.

AUTORRADIOGRAFÍA

Se añaden Anticueros radiactivos contra una proteína o sondas radioactivas de ácidos nucleicos (con secuencia conocida). Se espera a que reaccionen (A). Se coloca la membrana de nitrocelulosa sobre una placa fotográfica y se revela (B).

ENLACES

El descubrimiento de la radioactividad

La hibridación "Southern blot"

Animación de la técnica del Southern blot

Animación de la técnica del Southern blot