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PRIMER CURSO DEL GRADO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

PRIMER CURSO DEL GRADO DE BIOTECNOLOGÍA

METODOLOGÍA

BIOQUÍMICA BÁSICA

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(CURSO 2014-2015)

PROGRAMA

TEMARIO

Tema 1.- Artículos y revistas científicas: estructura de un manuscrito científico. Cómo se escribe un artículo de investigación. Cómo se publica un artículo de investigación. Tipos de revistas científicas. El factor de impacto. Revistas en formato electrónico.

Tema 2.- Búsqueda bibliográfica: Bases de datos de artículos científicos. La base de datos PubMed. Estructura de un registro PubMed. El motor de búsqueda de PubMed. Estrategias de búsqueda. Bibliometría: Journal of Citation Reports y Science Citation Index.

Tema 3.- El método científico en la investigación bioquímica: planteamiento de una hipótesis. Diseño experimental. Tratamiento de los resultados. Elaboración de conclusiones. Consideraciones éticas.

Tema 4.- Buenas prácticas en un laboratorio de bioquímica: Identificación de peligros (físicos, químicos, biológicos y radiológicos). Medidas de seguridad generales y personales. Normativas de seguridad. Comportamiento en situaciones de emergencia.

Tema 5.- Niveles de experimentación en bioquímica: estudios con animales intactos, con órganos, tejidos o células aisladas. Estudios moleculares (estructurales o funcionales). Sistemas celulares. Técnicas para la separación de diferentes tipos celulares (centrifugación, elutriación centrífuga, citometría de flujo). Cultivos celulares. Cuantificación y viabilidad celular. Líneas celulares. Cuantificación y viabilidad celular. El hemocitómetro.

Tema 6.- Fraccionamiento subcelular: Métodos para la homogeneización y obtención del extracto crudo. Centrifugación preparativa (diferencial y en gradiente de densidad). Enzimas marcadores para identificar los diversos orgánulos celulares. Viabilidad de los orgánulos. Centrifugación analítica.

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Tema 7.- Cromatografía. Conceptos básicos y principios generales. Técnicas cromatográficas basadas en la polaridad (cromatografía líquido-sólido, cromatografía gas-líquido, cromatografía líquido-líquido). Técnicas cromatográficas basadas en la carga (cromatografía de intercambio iónico). Técnicas cromatográficas basadas en el tamaño (cromatografía de tamizado molecular). Cromatografía de afinidad.

Tema 8.- Técnicas electroforéticas. Conceptos básicos y principios generales. Soportes electroforéticos. Métodos de tinción. Electroforesis en gradiente. Electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de SDS. Isoelectroenfoque. Electroforesis bidimensional. Electroforesis capilar.

Tema 9.- Técnicas espectrofotométricas. Conceptos básicos y principios generales. Cromóforos en bioquímica. Coeficiente de absorción molar. La ley de Lambert-Beer. Instrumentación: espectroscopía visible y ultravioleta.

Tema 10.- Diseño de un ensayo enzimático. Métodos para la cuantificación de la actividad catalítica. Determinación experimental de los parámetros cinéticos.

Tema 11.- Técnicas radioquímicas. Átomos e isótopos. Desintegración radioactiva. Tipos de emisiones radioactivas. Unidades de radioactividad. Detección y medida de radioactividad.

Tema 12.- Técnicas inmunoquímicas. Anticuerpos. Interacción antígeno-anticuerpo. Anticuerpos policlonales y monoclonales. Marcaje de anticuerpos. Inmunoprecipitación. Inmunoensayos (RIA, IRMA, ELISA).

Tema 13.- Técnicas de hibridación. Desnaturalización y renaturalización del ADN. Efectos hipocrómico e hipercrómico. Preparación y marcaje de sondas. Hibridación de ácidos nucleicos. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). RTPCR. Chips de ADN.

Tema 14-. Técnicas de identificación (blotting). Conceptos básicos. Transferencia (blotting). Southern blot. Northern blot. Western-blot. Dot-blot.

 

PRÁCTICAS DE LABORATORIO

1.- Métodos de ruptura celular. Cuantificación de proteína.

2.- Fraccionamiento subcelular. Centrifugación en gradiente de densidad.

3.- Obtención y preparación de mitocondrias. Determinacion de la viabilidad mitocondrial.

4.- Cromatografía de tamizado molecular. Determinación de la masa molecular de una proteína.

5.- Cromatografía de intercambio iónico. Preparación de gradiente.

6.- Electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida-SDS.

7.- Electroforesis de ácidos nucleicos en gel de agarosa.

 

PRÁCTICAS DE ORDENADOR

1.- Búsqueda bibliográfica en PubMed

2.- Journal of Citation Reports

3.- Science Citation Index

 

PRÁCTICAS DE AULA

Problemas de centrifugación, radioactividad, espectrofotometría, cinética enzimática.

Radioinmunoensayo: recta patrón y cálculo de concentraciones.

Diseño de cebadores para PCR (secuencia, A260 y temmperatura de hibridación).

 

BIBLIOGRAFÍA

Bioquímica. Técnicas y Métodos (libro + CD). Pilar Roca, Jordi Oliver y Ana Mª Rodríguez: Editorial Hélice, 2003.

Técnicas instrumentales de análisis en Bioquímica. J. M. García-Segura, J. G. Gavilanes, A. Martínez del Pozo y otros. Editorial Síntesis, 2002.

Técnicas de Bioquímica y Biología Molecular. D. Freifelder. Editorial Reverté, 2003.

Biochemistry Laboratory: modern theories and techniques. Rodney F. Boyer. Pearson Education, 2009 .

Principles and Techniques of Biochemistry and Molecular Biology. K. Wilson and J. Walker. Cambridge University Press, 2005.

 

ENLACES

http://www.ehu.es/biomoleculas/

http://campus.usal.es/~dbbm//modmol/

http://www.biorom.uma.es

Programa de la asignatura (guía docente)..........................................